霍乱弧菌

  
霍乱弧菌
           霍乱弧菌
霍乱弧菌(v.cholera)是人类霍乱的病原体,霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行,主要表现为剧烈的呕吐腹泻,失水,死亡率甚高。属于国际检疫传染病。   霍乱弧菌包括两个生物型:古典生物型(classical biotype)和埃尔托生物型(el-tor bio-type)。这两种型别除个别生物学性状稍有不同外,形态和免疫学性基本相同,在临床病理及流行病学特征上没有本质的差别。自1817年以来,全球共发生了七次世界性大流行,前六次病原是古典型霍乱弧菌,第七次病原是埃尔托型所致。  1992年10月在印度东南部又发现了一个引起霍乱流行的新血清型菌株(0139),它引起的霍乱在临床表现及传播方式上与古典型霍乱完全相同,但不能被01群霍乱弧菌诊断血清所凝集,抗01群的抗血清对0139菌株无保护性免疫。在水中的存活时间较01群霍乱弧菌长,因而有可能成为引起世界性霍乱流行的新菌株。  

生物学性状

·形态与培养特性

  新从病人分离出古典型霍乱弧菌和eltor弧菌比较典型,为革兰氏阴性菌,菌体弯曲呈弧状或逗点状,菌体一端有单根鞭毛和菌毛,无荚膜与芽胞。经人工培养后,易失去弧形而呈杆状。取霍乱病人米泔水样粪便作活菌悬滴观察,可见细菌运动极为活泼,呈流星穿梭运动。营养要求不高,在ph8.8~9.0的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一ph不易生长,故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基。在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形,光滑,透明。  霍乱弧菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐,靛基质反应阳性,当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中,产生靛基质与亚硝酸盐,在浓硫酸存在时,生成红色,称为霍乱红反应,但其他非致病性弧菌亦有此反应,故不能凭此鉴定霍乱弧菌。el tor型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同。前者vp阳性而后者为阴性。前者能产生强烈的溶血素,溶解羊红细胞,在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环,古典型霍乱弧菌则不溶解羊红细胞。个别el tor型霍乱弧菌株亦不溶血。

·抗原性

  根据弧菌o抗原不同,分成Ⅵ个血清群,第Ⅰ群包括霍乱弧菌的两个生物型。第Ⅰ群a、b、c三种抗原成份可将霍乱弧菌分为三个血清型:含ac者为原型(又称稻叶型),含ab者为异型(又称小川型),a、b、c均有者称中间型(彦岛型)。

·抵抗力

  霍乱弧菌古典生物型对外环境抵抗力较弱,el-tor生物型抵抗力较强,在河水、井水、海水中可存活1~3周,在鲜鱼,贝壳类食物上存活1~2周。  霍乱弧菌对热,干燥,日光,化学消毒剂和酸均很敏感,耐低温,耐碱。湿热55℃,15分钟,100℃,1~2分钟,水中加0.5ppm15分钟可被杀死。0.1%高锰酸钾浸泡蔬菜水果可达到消毒目的。在正常胃酸中仅生存4分钟。  

致病性和免疫性

·致病性

  人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者,主要通过污染的水源或饮食物经口传染。在一定条件下,霍乱弧菌进入小肠后,依靠鞭毛的运动,穿过粘膜表面的粘液层,可能藉菌毛作用粘附于肠壁上皮细胞上,在肠粘膜表面迅速繁殖,经过短暂的潜伏期后便急骤发病。该菌不侵入肠上皮细胞和肠腺,也不侵入血流,仅在局部繁殖和产生霍乱肠毒素,此毒素作用于不粘膜上皮细胞与肠腺使肠液过度分泌,从而患者出现上吐下泻,泻出物呈“米泔水样”并含大量弧菌,此为本病典型的特征。
霍乱弧菌
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  霍乱肠毒素本质是蛋白质,不耐热,56℃经30分钟,即可破坏其活性。对蛋白酶敏感而对胰蛋白酶抵抗。该毒素属外毒素,具有很强的抗原性。现已能将该毒素高度精制成晶状,仍保持极强的生物学活性。  霍乱肠毒素致病机理如下:毒素由a和b两个亚单位组成,a亚单位又分为a1和a2两个肽链,两者依靠二硫链连接。a亚单位为毒性单位,其中a1肽链具有酶活性,a2肽链与b亚单位结合参与受体介导的内吞作用中的转位作用。b亚单位为结合单位,能特异地识别肠上皮细胞上的受体。1个毒素分子由一个a亚单位和4℃6个b亚单位组成多聚体。霍乱肠毒素作用于肠细胞膜表面上的受体(由神经节苷脂gm1组成),其b亚单位与受体结合,使毒素分子变构,a精致单位进入细胞,a1肽链活化,进而激活腺苷环化酶(ac),使三磷酸腺苷(atp)转化为环磷酸腺苷(camp),细胞内 camp浓度增高,导致肠粘膜细胞分泌功能大为亢进,使大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻,由于大量脱水和失盐,可发生代谢性酸中毒,血循环衰竭,甚至休克或死亡。

·免疫性

  患过霍乱的人可获得牢固的免疫力,再感染者少见。病人在发病数日,血液中即可出现特异性抗体,7℃14天抗体滴度达高峰,随后逐渐下降至较低水平,但能持续约3个月之外。病后小肠内可出现分泌型lga。体液抗体与免疫的关系尚不清楚,一般认为局部 slga可在肠粘膜与病菌之间形成免疫屏障,有阻断粘附和中和毒素的作用。

·所致疾病

  引起烈性肠道传染病霍乱,为我国的甲类法定传染病。在自然情况下,人类是霍乱弧菌的唯一易感者。在地方性流行区,除病人外,无症状感染者也是重要传染源。高比例的无症状携带者有利于疾病的扩散,根据卫生状况,无症状携带者和病人的比率波动在10:1~100:1之间。  传播途径主要是通过污染的水源或未煮熟的食物如海产品、蔬菜经口摄入。居住拥挤,卫生状况差,特别是公用水源是造成暴发流行的重要因素。人与人之间的直接传播不常见。在正常胃酸条件下,如以水为载体,需饮入大于1010个细菌方能引起感染;如以食物作为载体,由于食物高强度的缓冲能力,感染剂量可减少到102~104个细菌。任何能降低胃中酸度的药物或其他原因,都可使人对霍乱弧菌感染的敏感性增加。  病菌到达小肠后,粘附于肠粘膜表面并迅速繁殖,不侵入肠上皮细胞和肠腺,细菌在繁殖过程中产生肠毒素而致病。O1群霍乱弧菌感染可从无症状或轻型腹泻到严重的致死性腹泻。在古典生物型霍乱弧菌感染中,无症状者可达60%;在El Tor生物型感染中,无症状者可达75%。霍乱弧菌古典生物型所致疾病较El Tor生物型严重。典型病例一般在吞食细菌后2~3天突然出现剧烈腹泻和呕吐,多无腹痛,每天大便数次或数十次。在疾病最严重时,每小时失水量可高达1升,排出由粘膜、上皮细胞和大量弧菌构成的如米泔水样的腹泻物。由于大量水分和电解质丧失而导致失水,代谢性酸中毒,低碱血症和低容量性休克及心力不齐和肾衰竭,如未经治疗处理,病人可在12~24小时内死亡,死亡率高达25%~60%,但若及时给病人补充液体及电解质,死亡率可小于1%。O139群霍乱弧菌感染比O1群严重,表现为严重脱水和高死亡率,且成人病例所占比例较高,大于70%,而O1群霍乱弧菌流行高峰期,儿童病例约占60%。  病愈后一些患者可短期带菌,一般不超过3~4周,真正的慢性带菌者罕见。病菌主要存在于胆囊中。 

微生物学诊断

  由于霍乱流行迅速,且在流行期间发病率及死亡率均高,危害极大,因此早期迅速和正确的诊断,对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。  (一)直接镜检  采取病人“米泔水样”大便或呕吐物。镜检(涂片染色及悬滴法检查)观察细菌形态,动力特征。  (二)细菌分离培养  可将材料接种至碱性蛋白胨水37℃培养6~8小时后,取生长物作形态观察,并转种于碱性平板作分离培养,取可疑菌落作玻片凝集,阳性者再作生化反应及生物型别鉴定试验。  (三)特异性制动试验  取检材或新鲜碱性蛋白胨水培养物一滴,置于载玻片上,再加霍乱弧菌多价诊断血清,加盖玻片,用暗视野镜观察,3分钟内运动被抑制的即为阳性,此法优点是快速而特异操作简便,但必须有数量较多的弧菌才检出。  (四)免疫荧光试验  除一般免疫荧光法外,还可用荧光菌球法检查。

特征

  霍乱弧菌所致的霍乱,为烈性肠道传染病,曾在世界上发生过几次大流行,至今仍未平息,因此,霍乱被列为国境检疫的传染病。  
霍乱弧菌
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霍乱弧菌有两个生物型,一为古典生物型,一为爱尔托生物型,这两个生物型在形态及血清学性状方面几乎相同,可作第四组霍乱噬菌体裂解试验,多粘菌素b敏感试验,鸡红细胞凝集试验,v-p(服-泼)二氏试验等试验加以鉴别:  本菌是需氧菌,营养要求不高,在普通培养基上生长良好。霍乱弧菌具有耐碱性,故常用碱性(ph值8.4~9.2)培养基选择性分离培养本菌。在碱性琼脂平板上生长后,呈水滴样光滑型菌落,而在碱性蛋白胨液体培养基中,生长迅速,培养6~8小时即可形成菌膜,利用这一特点,可以作快速增菌,进行鉴定。在庆大霉素琼脂平板上,生长快,8~10小时能生长出小菌落,可供鉴定用。霍乱弧菌能分解蔗糖甘露醇,产酸不产气,不能分解阿拉伯胶糖。  霍乱弧菌在未经处理的粪便中,可存活数天;在冰箱内的牛奶、鲜肉和鱼水产品中存活时间分别为2~4周、1周和1~3周;在室温下存放的新鲜蔬菜中,可存活1~5天;在砧板和布上可存活相当长时间;在玻璃瓷器、塑料和金属上存活时间不超过2天。霍乱弧菌古典生物型在外界环境中生存能力不强,而爱尔托生物型抵抗力较强,在河水、井水、池塘水和海水中可存活1~3周,甚至更长,有时在局部自然水中也能越冬。爱尔托生物型弧菌可粘附于海洋甲壳类生物表面,分泌甲壳酶,分解甲壳作为营养而长期存活,如爱尔托生物型弧菌被人工饲养的泥鳅鳝鱼吞食后,可在其体内生长繁殖,然后排入水中。  霍乱弧菌对热、干燥、日光及一般消毒剂均很敏感,经干燥2小时或加热55℃10分钟即可死亡,煮沸立即死亡;对酸敏感,在正常胃酸中仅能存活4分钟,接触1∶5000~1∶10000盐酸或硫酸、1∶2000~1∶3000升汞或1∶500000高锰酸钾,数分钟即被杀灭,在0.1%漂白粉中10分钟内即可死亡。氯化钠的浓度高于4%或蔗糖浓度在5%以上的食物、香料、醋及酒等,均不利于霍乱弧菌的生存。  

霍乱弧菌是如何使人发病的

  正常胃酸可杀灭霍乱弧菌,当胃酸分泌缺乏或低下,或入侵的霍乱弧菌数量较多,未被杀灭的弧菌就进入小肠,在碱性肠液内迅速繁殖,并通过粘液对细菌的趋化吸引作用、细菌鞭毛活动及弧菌粘蛋白溶解酶和粘附素等的作用,粘附于小肠粘膜的上皮细胞表面,并在此大量繁殖。  此菌产生强烈的外毒素,即霍乱肠毒素,由a亚单位和b亚单位组成。b亚单位与该处粘膜上皮细胞表面受体——神经节苷脂结合,a、b两种亚单位解离,a亚单位穿过细胞膜进入细胞内,激活腺苷酸环化酶(ac),使细胞内三磷酸腺苷(atp)转化为环磷酸腺苷(camp),使细胞内环磷酸腺苷含量提高,促使一系列反应加速进行,导致空肠到回肠部腺细胞分泌功能亢进,引起大量液体及血浆中的等离子进入肠腔,由于分泌功能超过肠道再吸收能力,从而造成严重的腹泻及呕吐;由于胆汁分泌减少,且肠腔中有大量水、粘液及电解质,故排泻物呈白色“米泔水”样;由于剧烈吐泻,导致脱水和电解质丢失,引起缺、缺钠及肌肉痉挛;由于碳酸氢根离子丢失,酸性代谢物在体内蓄积,引起代谢性酸中毒;由于有效血容量急剧减少,血液浓缩,导致尿量减少、血压下降,甚至休克;由于肾缺血、缺氧,细胞内缺钾,导致肾小管上皮细胞变性、坏死,造成急性肾功能衰竭。  主要病变均由严重脱水引起,临床可见指纹皱缩,皮下组织及肌肉干瘪。心、等脏器均见缩小。内脏浆膜无光泽。肠腔高度扩张、肠内充满泔水样液体,肠粘膜松弛,但粘膜上皮完整,无溃疡。胆囊内充满粘稠胆汁。肾小球及间质的毛细管扩张,肾小管肿胀、变性及坏死。其他脏器也有出血、变性等变化。  

防治原则

  必须贯彻预防为主的方针,作好对外交往及入口的检疫工作,严防本菌传入,此外应加强水、粪管理,注意饮食卫生。对病人要严格隔离,必要时实行疫区封锁,以免疾病扩散蔓延。  人群的菌苗预防接种,可获良好效果,现用加热或化学药品杀死的古典型霍乱菌苗皮下接种,能降低发病率。这种苗菌对el-tor型霍乱弧菌感染也有保护作用,但持续时间短,仅3-6个月。近年来,有使用口服菌苗(大剂量、反复服用),类毒素及类毒素与死菌的混合疫苗等,这些尚待现场验证,才能下结论。  治疗主要为及时补充液体和电解质及应用抗菌药物如链霉素、氯霉素、强力霉素、复方smz-tmp等。  

新闻

  2011年6月上海铜川路水产批发市场牛蛙被检出霍乱弧菌  据苏州市南环桥市场宣教文化中心副主任梁斓介绍,上周六,他们接到苏州市疾控中心通知,称昆山市疾控中心在当地一农贸市场内检出了含有霍乱弧菌的牛蛙,而霍乱弧菌正是人类发生霍乱的病原体。经货源追溯调查判定,该牛蛙全部来自上海铜川路水产批发市场。苏州市食品安全委员会办公室随后下发通知,要求各市场经营者暂停从上海有关方面采购牛蛙
霍乱弧菌
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  梁斓告诉记者,牛蛙一直颇受苏州市民的欢迎,目前该市场每天牛蛙的批发量在1万斤左右,价格在6到7元一斤,其中大部分来自上海铜川路水产批发市场。接到通知当天,他们立即停止销售牛蛙。目前从上海采购的牛蛙已退回。发生上述事件后,苏州南环桥市场随即对所有牛蛙进货渠道进行了检验检疫证等索证的检查。为满足苏州市民的需求,前天该市场已开始从浙江采购牛蛙:“在采购前我们都会严格审查出货方的检验检疫证明、出产地等。”  据苏州市卫生监督所副所长周敏介绍,上述霍乱弧菌主要存活在牛蛙的内脏中,而通常我们是不吃牛蛙内脏的,且霍乱弧菌在高温环境下即会死亡。只要我们吃的是烧熟烧透的牛蛙,一般不会对健康造成影响,市民没必要过于恐慌。目前苏州市卫监部门已开始在各餐饮单位检查牛蛙采购情况,通知经营者暂停从上海有关方面采购牛蛙。周敏说,苏州尚未发现食用牛蛙后患上霍乱的病例。